TEST MOLECOLARE RAPIDO - RT-LAMP per COVID-19

Cos'è LAMP?

"LAMP", acronimo di Loop-mediaiated Isothermal Amplification, è un metodo di amplificazione degli acidi nucleici semplice, rapido, specifico ed economico sviluppato esclusivamente da Eiken Chemical Co., Ltd.

L'amplificazione isotermica mediata da loop (LAMP) è un processo simile alla PCR-RT che, invece di utilizzare una serie di variazioni di temperatura per produrre copie del RNA virale, viene condotto alla temperatura costante di 60-65 °C. NON è quindi necessario l'utilizzo di un TERMOCICLATORE e consente di avere risultati RAPIDI (circa 60 min.)

La quantità di RNA prodotta nel test LAMP è molto più alta che in PCR-RT e per questo motivo il risultato positivo del test può essere “visto” direttamente senza la necessità di richiedere a una macchina per leggere i risultati.

LAMP è una metodica più recente rispetto a PCR-RT, è tecnicamente semplice e di facile utilizzo

Risultato positivo del test: - Un risultato LAMP positivo significa che la persona da cui è stato prelevato il campione è attualmente infetta dal virus.

Risultato negativo del test: - Un risultato LAMP negativo potrebbe indicare che la persona non è attualmente infetta, che il virus non è presente nel sito da cui è stato prelevato il campione o che è troppo presto, o troppo tardi dall’insorgenza dell’infezione per rilevare il virus. Questo è il motivo per cui quando i risultati dei test sono negativi ma la sintomatologia o la storia del paziente sono riconducibili ad un possibile contagio, il test viene ripetuto pochi giorni dopo per ridurre la possibilità di un falso negativo.

È caratterizzato dall'uso di 4 diversi primer specificamente progettati per riconoscere 6 regioni distinte sul gene target e il processo di reazione procede a temperatura costante utilizzando la reazione di spostamento del filamento. L'amplificazione e il rilevamento del gene possono essere completati in un unico passaggio, incubando la miscela di campioni, primer, DNA polimerasi con attività di spostamento del filamento e substrati a temperatura costante (circa 65 ° C).
Fornisce un'elevata efficienza di amplificazione, con il DNA che viene amplificato 10 ^ 9-10 ^ 10 volte in 15-60 minuti. A causa della sua elevata specificità, la presenza del prodotto amplificato può indicare la presenza del gene bersaglio.

Caratteristiche

• Non è necessario un passaggio per denaturare il doppio filamento in un unico filamento.
• L'intera reazione di amplificazione avviene continuamente in condizioni isotermiche.
• L'efficienza di amplificazione è estremamente elevata.
• Progettando 4 primer per riconoscere 6 regioni distinte, il metodo LAMP è in grado di amplificare in modo specifico il gene bersaglio.
• Il costo totale può essere ridotto, poiché la dose LAMP non richiede reagenti speciali o apparecchiature sofisticate.
• I prodotti amplificati hanno una struttura costituita da ripetizioni alternativamente invertite della sequenza target sullo stesso filamento.
• L'amplificazione può essere eseguita con modelli di RNA seguendo la stessa procedura dei modelli di DNA, semplicemente mediante l'aggiunta di trascrittasi inversa.